内蒙古地区白鲜皮柠檬苦素含量研究

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点击次数:54 更新时间:2019年12月30日18:22:46 打印此页 关闭

目的 对不同地区白鲜皮柠檬苦素含量分析比较。

方法 采用高效相色谱(HPLC) 法测定柠檬苦素的含量。色谱条件: 色谱柱DiamonsiⅡC18(250 mm×4.6 mm,5 μm) ; 流动相∶乙腈水(42 ∶ 58) ;流速:1.0 ml/min,检测波长:210 nm; 柱温30 ℃; 进样量:5 μl。结果 采用外标法测定,加样回收率98.32%(n= 5)。不同产地含量存在差异。

结论 内蒙古牙克石附近产白鲜皮柠檬苦素含量最高,内蒙古自治区扎兰屯市卧牛河镇白鲜皮柠檬苦素含量最低,含量与其药材原植物的形态呈正相关。在白鲜皮的产区,当地群众还将粉末用作止血药,用于外伤出血及内脏出血等病症。中国植物志中记载白鲜属共有植物5种,分布于欧亚大陆,东至我国的东北,东南至我国江西省北部; 我国有2种,分别是白鲜及新疆白鲜《中国药典》2010年版收载白鲜为药材白鲜皮的正品来源。檬苦素为三萜类成分,有关研究表明,该化合物具有抗氧化及抗真菌等活性。《中国药典》2015年版收载了白鲜皮的梣酮及黄柏酮的含量测定方法; 文献报道了该药材白鲜碱的含量测定方法; 白鲜皮中柠檬苦素含量测定方法未见报道。为此,作者对白鲜皮中柠檬苦素的测定方法进行研究,建立了高效液相色谱的测定方法,为提升白鲜皮质量标准提供科学依据。

一、材料与方法1.实验材料:型高效液相色谱仪( 美国Waters公司) ;UV-1901PC型紫外分光光度计( 上海奥析科学仪器有 限 公 司)。柠 檬 苦 素 标 准 品 ( 批 号:110800-200404) 购自中国药品生物制品检定所; 实验用水为超纯水,乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

二、白鲜皮样品采集内蒙阿荣旗、扎兰屯、博克图等地,由齐齐哈尔市药品食品检测中心刘春峰鉴定。

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样品编号见表1.

三、实验方法: (1) 对照品溶液的制备: 取柠檬苦素对照品适量,精 密 称 定,用 乙 腈 溶 解 并 定 容 至25 ml,得 浓 度 为0.2 mg / ml的柠檬苦素对照品溶液,用0.45 μm微孔滤膜过滤,备用。(2) 样品溶液的制备: 白鲜皮经干燥、粉碎过80目筛。精密称取样品10 g,每个样品取两份,分别对应装入1~ 16号250 ml的圆底烧瓶中,分别加入40 ml石油醚,于70 ℃水浴回流提取2次,每次1 h,合并滤液。过滤,药渣加入40 ml二氯甲烷,于85 ℃水浴回流提取2次,每次1 h,过滤,合并滤液。60 ℃减压回收滤液。浸膏加甲醇溶解,分别定容于8支100 ml容量瓶中,备用。(3) 色谱条件: 采用反相高效液相色谱法,Diamonsi ⅡC18(250 mm×4.6 mm,5 μm) ,流动相为乙腈-水(42 ∶ 58,v/v) ,流速为1.0 ml/min,柱温为30 ℃,进样量5 μl,检测波长为210 nm。(4) 柠檬苦素标准曲线的绘制: 分别取柠檬苦素对照聘溶液1、2、4、6、8 ml于10 ml容量瓶中,乙腈定容,在相同条件下测定。以峰面积(A) 对浓度(C) 作线性回归,得标准曲线回归方程为A = 3.971 5C-2.329 5,r =0.998 8,浓度在(20 ~ 160)μg / ml范围内线性关系良好。

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四、结果与结论1.含量测定方法学研究: (1) 精密度试验: 取同一标准品溶液,连续进样5次,测定峰面积,RSD为0.33%,表明本方法精密度较好。(2) 稳定性试验: 取同一样品溶液,分别在0、0.5、1、1. 5、2、2,5、3 h进样5 μl,按照峰面积计算RSD为1.01%,结果表明样品溶液至少在3 h内稳定。(3) 重复性试验及柠檬苦素含量测定: 取同一编号的药材粉末5份,按样品溶液的制备方法平行制备,测定峰面积并计算,得柠檬苦素平均含量为3.33 mg/g,RSD = 0.84%。(4) 加样回收率试验: 取已知含量的样品溶液5份,分别加入标准品溶液0.10、0.20、0.40 ml( 各两份) ,测定柠檬苦素含量。求得平均回收率为98.32%,RSD = 2.6%。2.回归方程: 对照品测定结果处理,得到回归方程:A =3.971 5C-2.329 5,r = 0.998 8。3.样品含量测定: 采用上述制定的HPLC分析方法测定了8个不同产地白鲜皮柠檬苦素的含量。

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结果见表3。

五、讨论 (1) 首次建立了白鲜皮中柠檬苦素的含量测定方法,填补测定方法的空白。所建立的方法简便快捷、准确可靠,为白鲜皮质量标准的提升提供依据。(2) 对不同产地白鲜皮中柠檬苦素的含量进行测定,从测定的数据中看到不同产地的白鲜皮柠檬苦素的含量存在差异。内蒙古牙克石市附近产白鲜皮柠檬苦素含量最高,内蒙古自治区扎兰屯市卧牛河镇白鲜皮柠檬苦素含量最低。与其药材原植物的形态呈正相关。

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